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一、技術簡介：

抑郁癥，阿爾茲海默癥癥和帕金森被稱為三大主要精神類疾病，目前研究此類疾病模型主要方法是建立相關的動物模型，并進行相關行為學的實驗分析。

本公司經過多年摸索，成功復制動物模型，并具備常規的行為學分析系統，可很好的開展相關實驗。

二、實驗流程：

A.抑郁癥造模及行為學檢測

1.抑郁造模方法：1）糖皮質激素誘導抑郁；2)慢性不可預知溫和應激 (CUMS)抑郁模型；3)慢性束縛應激（CRS）抑郁模型　

2.抑郁行為學檢測方法：1)曠場實驗；2)強迫游泳實驗；3)糖水偏好實驗；4)懸尾實驗

B.帕金森造模及行為學檢測

造模方法：神經毒素：6-OHDA ，MPTP

帕金森疾病動物模型評價方法：帕金森動物模型會出現震顫麻痹、肌肉僵直等外在行為學上的癥狀，結合腦組織病理學指標。

a. 行為學實驗：游泳試驗，懸掛試驗，爬桿實驗

b. 病理學指標：腦組織形態學（HE染色），紋狀體及黑質內的神經元數量

c. 生化指標：紋狀體內多巴胺定量檢測，抗氧化酶活力檢測

C. 阿爾茲海默癥造模及行為學檢測

模型簡介：阿爾茲海默癥（AD）屬于中樞神經系統退行性疾病，除了散發型AD(sAD)外，已知APP、PSEN1和PSEN2等基因的突變會引發家族型AD(fAD)。AD的主要病理特點是細胞內由過度磷酸化的Tau蛋白異常聚集引起的神經原纖維纏結的形成和Aβ(白-amyloid peptides)多肽為核心的老年斑在前腦基底、大腦皮層和海馬體中的沉積。

造模方法：SD大鼠（250-300g）均采用1%戊巴比妥鈉40μg/g腹腔內注射麻醉，麻醉后繼而固定于腦立體定位儀上。按照大鼠腦立體定位圖譜，以前囟為零起點，前囟后3.5 mm處為穿刺點，中線右側旁開2mm，而后牙科鉆鉆開顱骨，采用微量注射器自腦表面垂直進針3mm，即：(AP= -3.5 mm, ML=2.0 mm, DV=3.0 mm)，雙側海馬CA1區緩慢勻速注射Aβ1-40各10 μg (1 μL)，留針5 min，退針后縫合傷口。一周后進行水迷宮行為學檢測。

行為學檢測：所有組別，于給藥后21d，進行Morris水迷宮試驗，試驗分為定位航行實驗和空間探索實驗。

1. 定位航行實驗：大鼠連續接受5天的訓練，每天4次，每次時間間隔30min，記錄下大鼠從4個入水點和入水并找到平臺所需要的時間，即逃避潛伏期。4次潛伏期的平均成績作為當日的最終結果進入到最后統計。

2. 空間探索實驗：實驗的第6天，撤去平臺，從距離平臺的最遠端入水后，將大鼠放入水中，記錄下30s內大鼠的游泳軌跡，并觀察分析大鼠在目標象限的停留時間，以及它的穿越平臺的次數。

檢測指標：行為學結束后，將各組大鼠摘取全腦，冰上剝去小腦，將剩余部分左右對切，一半放入4%多聚甲醛中固定，用于病理學檢測。另一半取海馬用于PCR和蛋白檢測。

組織病理學：1. 尼氏染色 海馬組織固定后石蠟切片，進行尼氏染色，觀察海馬區神經細胞形態和數量。光學顯微鏡下，計數視野下每組大鼠同一部位的神經元數量，作統計分析。2. 免疫熒光染色：免疫熒光染色，觀察海馬區Aβ1-40染色情況。熒光顯微鏡下，計數視野下每組大鼠同一部位的陽性斑塊數量，作統計分析。3. TUNEL染色 海馬組織進行TUNEL染色，觀察神經元凋亡情況。熒學顯微鏡下，計數視野下每組大鼠同一部位的陽性染色數量，作統計分析。

標志因子水平

1. RT-qPCR檢測：收集海馬組織，提取RNA，反轉錄cDNA，PCR檢測caspase-3，Bcl-2和Bax的表達。

2. Western-blot檢測：收集海馬組織蛋白，檢測active-caspase-3，Bcl-2和Bax的蛋白表達。

三、結果說明：

1. 客戶提供：實驗藥物

2. 公司提供：動物造模、基本實驗步驟、圖片、數據分析結果。

3. 實驗周期：30-60個工作日。

四、聯系方式：

電話：13816429514（微信）   400-9933-522